AAV在眼部注射方法有哪些
肺部注射包括鼻內(nèi)滴注法和氣管插管術(shù)。鼻內(nèi)滴注法操作簡單，直接將病毒懸液滴入鼻腔，但顆?？赡艹练e在上呼吸道，需要較大劑量的病毒。氣管插管術(shù)能將病毒載體直接輸入肺部，避免上呼吸道損失，但需特殊設(shè)備和技巧。此外，還有氣管內(nèi)注射，操作與鼻內(nèi)滴注法類似，但直接注入氣管。
) 麻醉小鼠，確保其對疼痛刺激無反應(yīng)。2) 保護小鼠眼睛，保持濕潤并抑制眨眼反射。3) 保持小鼠體溫，防止麻醉后過低。4) 清潔小鼠耳朵，并消毒。5) 打開鼓室大皰，暴露鐙骨動脈和圓窗膜。6) 輕輕在圓窗膜中心穿刺，觀察液體流出。7) 將0.6~2μL的AAV載體注射至耳蝸鼓階。
AAV因其特異性而成為首選載體，不同血清型針對特定組織有較高感染能力，通過合適注射方法可實現(xiàn)體內(nèi)特異性表達。實現(xiàn)特異性表達的方法包括選擇組織特異性血清型、使用細胞特異性啟動子以及局部注射等。
最后，AAV的注射方式包括腦立體定位、腦室注射等，這些方法能夠?qū)崿F(xiàn)基因在特定神經(jīng)區(qū)域的精確表達。以腦立體定位為例，如圖9所示，通過AAV9結(jié)合CamKIIα特異性啟動子在小鼠海馬區(qū)進行注射，可以實現(xiàn)基因在興奮性神經(jīng)元的特異性表達。
首先，對實驗動物進行稱重和麻醉，確保動物處于完全麻醉狀態(tài)。 然后，清理動物頭頂眼睛至耳朵之間區(qū)域的毛發(fā)，確保注射區(qū)域的清潔與無干擾。 將麻醉后的動物固定于腦立體定位儀上，確保頭部固定，鼻對中線，頭部不動，提尾不掉，大腦放置水平。 手術(shù)過程中，消毒清理動物頭皮，暴露顱骨表面。
針對脂肪組織的感染，通常采用定點多點注射的方法，以降低脫靶效應(yīng)并減少病毒用量。對于難以通過常規(guī)注射方法達到感染的脂肪組織，如內(nèi)臟脂肪或大面積脂肪區(qū)域，采用腹腔注射AAVRec2血清型則成為有效解決方案。AAV注射劑量的選擇需要根據(jù)具體實驗條件和目標進行調(diào)整。
