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AAV在眼部注射方法有哪些

首先，所有的操作都應(yīng)在符合相應(yīng)生物安全等級(jí)的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中進(jìn)行，確保最大程度的防護(hù)。在處理過程中，務(wù)必避免直接接觸病毒載體，包括通過傷口注射、誤食、吸入或接觸黏膜。萬(wàn)一發(fā)生皮膚接觸或?yàn)R入眼睛的情況，應(yīng)立即用大量清水沖洗，以沖洗掉可能沾染的病毒。

常見問題解答包括：rAAV中樞注射滴度和注射體積一般是多少？滴度10^12 vg/mL，體積200-300nL左右。AAV感染小鼠后多久可以觀察結(jié)果？一般情況下，三周后可在胞體檢測(cè)到信號(hào)，六周后可在末梢檢測(cè)到信號(hào)。

最后，AAV的注射方式包括腦立體定位、腦室注射等，這些方法能夠?qū)崿F(xiàn)基因在特定神經(jīng)區(qū)域的精確表達(dá)。以腦立體定位為例，如圖9所示，通過AAV9結(jié)合CamKIIα特異性啟動(dòng)子在小鼠海馬區(qū)進(jìn)行注射，可以實(shí)現(xiàn)基因在興奮性神經(jīng)元的特異性表達(dá)。

注射方式的選擇對(duì)于感染效率和感染范圍至關(guān)重要。定點(diǎn)多點(diǎn)注射優(yōu)勢(shì)在于降低rAAV載體脫靶效應(yīng)、且病毒用量較少，對(duì)于難感染的內(nèi)臟脂肪或大范圍脂肪感染，腹腔注射AAVRec2血清型可以實(shí)現(xiàn)有效感染。AAV注射劑量需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和目標(biāo)細(xì)胞類型精確計(jì)算，以確保病毒的表達(dá)水平達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。

對(duì)于需要直接靶向的策略，腸系膜動(dòng)脈注射不可忽視，盡管它涉及到手術(shù)操作。具體步驟包括異氟醚麻醉、脾臟區(qū)域穿刺、SMA暴露并固定，然后使用微血管放大器處理并注射定制針頭。注射后，記得妥善移除器械，恢復(fù)血液流動(dòng)。在選擇注射方法和劑量時(shí)，我們建議您在預(yù)實(shí)驗(yàn)階段進(jìn)行個(gè)性化調(diào)整。

針對(duì)脂肪組織的感染，通常采用定點(diǎn)多點(diǎn)注射的方法，以降低脫靶效應(yīng)并減少病毒用量。對(duì)于難以通過常規(guī)注射方法達(dá)到感染的脂肪組織，如內(nèi)臟脂肪或大面積脂肪區(qū)域，采用腹腔注射AAVRec2血清型則成為有效解決方案。AAV注射劑量的選擇需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)條件和目標(biāo)進(jìn)行調(diào)整。